Zloženie, príprava, rozdelenie a sterilizácia živných pôd v mikrobiológií (Úvod do mikrobiológie)

08.08.2011 16:21

 

Živná pôda je substrát, chemické prostredie, ktoré nám slúži na kultiváciu mikroorganizmov.

Zloženie ŽP - jej zloženie by sa malo čo najviac podobať prirodzenému prostredieu MO, musí obsahovať:

1. Voda – destilovaná, sterilná

2. Makrobiogénne prvky – C, N, S, P a katióny kovov Na, Ca, K, Mg

  • C uhlík – je limitujúcim prvkom a pridáva sa vo forme organickej, cukry, monosacharidy, di a polysacharidy – škrob, celulóza, glukóza, maltóza. V prípade autotrófnych MO nepridávame C
  • N – dusík – sa pridáva v organickej forme – bielkoviny alebo anorganickej – amoniakálny, dusitanový alebo dusičnanový.
  • F – fosfor a S – síra – sa pridávajú v anorganickej forme (hydrogén alebo dyhydrogén fosforečnanov, sírany a siričitany)
  • Na – sodík, Ca – vápnik, K – draslík a Mg – horčík – sa pridávajú ako anorganické soli, koncentrácia je vysoká pretože sú dôležité pri regulácii príjmov živín do bunky

3. Mikrobiogénne prvky – Cu, Co, Fe, Mn, Mo:

  • pridávajú sa v stopových množstvách
  • sú dôležité pri enzymatických procesoch, fixácii N
  • majú oxidačno redukčné vlastnosti

4. Vitamíny, rastové látky, selektívne zložky, Agar – agart a želatína:

  • selektívne zložky:

ü     antibiotiká, inhybujú rast bakteriálnej mikroflóry (chloramfenikol)

ü     pri kultivácii streptomycét streptomycín a aktidión

ü     pri kultivácii mikroskopických húb sa pridáva ja bengálska červeň, ktorá inhybuje rast rýchlorastúcich MH

·        Agar – agar:

ü     Je polysacharid, vyrába sa z červených morských rias, obsahuje len 0,3% N (+), má veľmi vysoký bod topenia 96°C (+), veľmi nízky bod tuhnutia 40°C (+), pridáva sa v malých navážkach 1,5 – 3% lebo je veľmi drahý (-)

·        Želatína:

ü     Zákusky, jogurty, nesmie vrieť, je bielkovinového charakteru, obsahuje 16 – 17% N (-), bod topenia je 20°C (-), veľké návažky 15 – 30% (-), používa sa na dôkaz proteolitických enzýmov

Príprava živných pôd:

·        Tekuté ŽP – riadime sa zásadou postupného rozpúšťania navážených zložiek podľa príslušného predpisu. Vo vode najprv rozpúšťame dusíkaté živiny a po ich rozpustení pridáme navážené množstvo cukrov, solí a ostatných látok. Po rozpustení všetkých zložiek zahrievame pH ŽP a podľa potreby upravíme na predpísanú hodnotu pridaním malého množstva 0,1 M H3PO4 alebo 0,1 M NaOH. Musíme brať do úvahy, že pri sterilizácii a pH čiastočne zníži. Z tekutých živných roztokov pripravujeme rôsolovité pridaním Agaru alebo želatíny.

 Rozdelenie ŽP:

  • Podľa konzistencie sa delia:

ü      Tekuté – mäsopetónový bujón,

ü      Polotuhé – živné médiá do ktorých sa dá agar – agar

ü      Tuhé – zelenina, chlieb, ovocie,

ü      Sypké – slama, šroty

·        Podľa pôvodu:

ü      Prirodzené  -  natívne – sú dostupné bežne v prírode, rozpúšťadlom je obyčajná pitná voda, sú to produkty rastlinného a živočíšneho pôvodu (krv, mlieko, zelenina, zem)

ü      Polosyntetické – používajú sa extrakty a výluhy z produktov rastlinného a živočíšneho pôvodu + chemické látky (mäsovopetónový bujón, kvasničný výluh), rozpúšťadlom je destilovaná voda

ü      Syntetické – s presne známym chemickým zložením, je s nimi ľahká práca, rozpúšťadlom je deionizovaná a redestilovaná voda

·        Podľa použitia:

ü      Kolektívne – všeobecné, kultivujeme tu celú skupinu MO, slúžia na CPM celkový počet MO a živná pôda je MPA (mäsopeptónový agar)

ü      Selektívne – výberoví ŽP, využívame na kultiváciu jedného druhu, rodu, fyziologickej skupiny (endov agar, pre koliformné baktérie tergitol, pre nitrogénne ASHBYHO agar)