Zloženie, príprava, rozdelenie a sterilizácia živných pôd v mikrobiológií (Úvod do mikrobiológie)
08.08.2011 16:21
Živná pôda je substrát, chemické prostredie, ktoré nám slúži na kultiváciu mikroorganizmov.
Zloženie ŽP - jej zloženie by sa malo čo najviac podobať prirodzenému prostredieu MO, musí obsahovať:
1. Voda – destilovaná, sterilná
2. Makrobiogénne prvky – C, N, S, P a katióny kovov Na, Ca, K, Mg
- C uhlík – je limitujúcim prvkom a pridáva sa vo forme organickej, cukry, monosacharidy, di a polysacharidy – škrob, celulóza, glukóza, maltóza. V prípade autotrófnych MO nepridávame C
- N – dusík – sa pridáva v organickej forme – bielkoviny alebo anorganickej – amoniakálny, dusitanový alebo dusičnanový.
- F – fosfor a S – síra – sa pridávajú v anorganickej forme (hydrogén alebo dyhydrogén fosforečnanov, sírany a siričitany)
- Na – sodík, Ca – vápnik, K – draslík a Mg – horčík – sa pridávajú ako anorganické soli, koncentrácia je vysoká pretože sú dôležité pri regulácii príjmov živín do bunky
3. Mikrobiogénne prvky – Cu, Co, Fe, Mn, Mo:
- pridávajú sa v stopových množstvách
- sú dôležité pri enzymatických procesoch, fixácii N
- majú oxidačno redukčné vlastnosti
4. Vitamíny, rastové látky, selektívne zložky, Agar – agart a želatína:
- selektívne zložky:
ü antibiotiká, inhybujú rast bakteriálnej mikroflóry (chloramfenikol)
ü pri kultivácii streptomycét streptomycín a aktidión
ü pri kultivácii mikroskopických húb sa pridáva ja bengálska červeň, ktorá inhybuje rast rýchlorastúcich MH
· Agar – agar:
ü Je polysacharid, vyrába sa z červených morských rias, obsahuje len 0,3% N (+), má veľmi vysoký bod topenia 96°C (+), veľmi nízky bod tuhnutia 40°C (+), pridáva sa v malých navážkach 1,5 – 3% lebo je veľmi drahý (-)
· Želatína:
ü Zákusky, jogurty, nesmie vrieť, je bielkovinového charakteru, obsahuje 16 – 17% N (-), bod topenia je 20°C (-), veľké návažky 15 – 30% (-), používa sa na dôkaz proteolitických enzýmov
Príprava živných pôd:
· Tekuté ŽP – riadime sa zásadou postupného rozpúšťania navážených zložiek podľa príslušného predpisu. Vo vode najprv rozpúšťame dusíkaté živiny a po ich rozpustení pridáme navážené množstvo cukrov, solí a ostatných látok. Po rozpustení všetkých zložiek zahrievame pH ŽP a podľa potreby upravíme na predpísanú hodnotu pridaním malého množstva 0,1 M H3PO4 alebo 0,1 M NaOH. Musíme brať do úvahy, že pri sterilizácii a pH čiastočne zníži. Z tekutých živných roztokov pripravujeme rôsolovité pridaním Agaru alebo želatíny.
Rozdelenie ŽP:
- Podľa konzistencie sa delia:
ü Tekuté – mäsopetónový bujón,
ü Polotuhé – živné médiá do ktorých sa dá agar – agar
ü Tuhé – zelenina, chlieb, ovocie,
ü Sypké – slama, šroty
· Podľa pôvodu:
ü Prirodzené - natívne – sú dostupné bežne v prírode, rozpúšťadlom je obyčajná pitná voda, sú to produkty rastlinného a živočíšneho pôvodu (krv, mlieko, zelenina, zem)
ü Polosyntetické – používajú sa extrakty a výluhy z produktov rastlinného a živočíšneho pôvodu + chemické látky (mäsovopetónový bujón, kvasničný výluh), rozpúšťadlom je destilovaná voda
ü Syntetické – s presne známym chemickým zložením, je s nimi ľahká práca, rozpúšťadlom je deionizovaná a redestilovaná voda
· Podľa použitia:
ü Kolektívne – všeobecné, kultivujeme tu celú skupinu MO, slúžia na CPM celkový počet MO a živná pôda je MPA (mäsopeptónový agar)
ü Selektívne – výberoví ŽP, využívame na kultiváciu jedného druhu, rodu, fyziologickej skupiny (endov agar, pre koliformné baktérie tergitol, pre nitrogénne ASHBYHO agar)