Izolácia mikroorganizmov (Úvod do mikrobiológie)

  Izolácia mikroorganizmov:

·        Pre štúdium morfologických, fyziologických a biochemických vlastností ktoréhokoľvek mikrobiálneho druhu je nevyhnutné získať ho v čistej kultúre.

·        Izolovať mikrobiálny druh znamená oddeliť ho od ostatných druhov v biocenóze a vypestovať ho na živnej pôde z jednej bunky tak, aby sme získali potomstvo s rovnakými genetickými vlastnosťami.

·        Pri získavaní čistej kultúry mikroorganizmov používame viacero metód laboratórnych techník. Vyberáme ich v závislosti na charaktere substrátu, z ktorého kultúru izolujeme a na početnom zastúpení druhu v danom substráte. Iný metodický postup zvolíme pri pevných alebo sypkých substrátoch (pôda, kompost, siláž, maštaľný hnoj), iný pri tekutých (voda, mlieko) a plynných substrátoch (vzduch).

·        Dôležité je aj početné zastúpenie druhu, ktorý chceme izolovať. Vždy musíme pripraviť riedenie takého stupňa, aby na živnej pôde vyrástli ojedinelé kolónie, ktoré potom ďalej preočkovávame. To znamená, že ak je skúmaný druh v substráte zastúpený vo veľkom množstve, pripravíme riedenie. Ak je málopočetný, najprv ho namnožíme v nahromad'ovacej kultúre a potom preočkujme na živnú pôdu buď priamo alebo vo vyhovujúcom zriedení.

·        Pre jednoduchšiu a efektívnejšiu izoláciu mikrobiálnych druhov i rodov zo substrátov obsahujúcich široké spektrum mikroorganizmov využívame metódy založené na špecifických skupinových, rodových alebo druhových vlastnostiach. Medzi tieto vlastnosti patria rozdielne nutrične požiadavky, rozdielne nároky na dĺžku a teplotu kultivácie, pH živnej pôdy, vzťah k molekulovému kyslíku (aeróbna a anaeróbna kultivácia) a rozdielne reakcie na pridanie špecifických fyziologicky aktívnych látok (napr. antibiotiká). Reguláciou uvedených podmienok dosahujeme prvotné roztriedenie zmiešanej kultúry. Takto získané kultúry čistíme preočkovaním a ich čistotu priebežne kontrolujeme mikroskopicky.

·        Najľahšia je izolácia mikroorganizmov, ktoré je možné pestovať na selektívnej živnej pôde (napr. nitrogénne baktérie na Ashbyho agare, urobaktérie na živnej pôde, v ktorej je zdrojom dusíka močovina).

·        Na    izoláciu    mikroorganizmov    používame    aj    technické    prostriedky mikromanipulátor a monospórický izolátor:

 Mikromanipulátor  - je doplnkové zariadenie mikroskopu, založené na izolácii bunky alebo spóry pomocou kapilárnej pipetky zo špeciálnej Wingeovej komôrky. Pipetka je ovládaná vodiacim zariadením, ktoré umožňuje prostredníctvom prevodov (či už mechanických, pneumatických alebo hydraulických) veľmi jemný posun zariadenia. S izolovanou bunkou alebo spórou naočkujeme pripravenú sterilnú živnú pôdu.

   Monospórický izolátor -  je tiež doplnkové zariadenie k mikroskopu. Pozostáva z vlastného izolátora, objektívu pre monospórickú izoláciu, dúchadla a vzdušného filtra. Nasadením izolátora na tento špeciálny objektív sa uzavrie malý priestor, do ktorého nastavením objektívu umiestnime spóru. Posunom objektívu nastavujeme súčasne aj vypichovadlo slúžiace na vykrojenie valčeka živnej pôdy so spórou. Tento valček so spórou z vypicho vadia vytlačíme dúchadlom, ktoré vháňa filtrovaný vzduch. Izolovanú spóru necháme vyklíčiť a vegetatívne bunky rozmnožíme v sterilnej živnej pôde.

·        Izolované čisté kultúry mikroorganizmov uchovávame na šikmých agaroch v skúmavkách v determinovaných podmienkach.